免费120秒体验试看5次,国产亚洲一本大道中文在线,在线播放真实国产乱子伦,三年高清片大全

風幕式通風柜:實驗室通風的一場革命.......
  咨詢電話:0531-68651111

行業(yè)新聞

解析PCR實驗的原理、分類及品牌市場

PCR概念

  聚合酶鏈反應(基因擴增):基本原理 類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是模擬體內DNA復制過程,在體外特異性擴增DNA片段的一種技術。

  PCR的應用領域

  1、遺傳病和某些疑難病的診斷

  2、病原體的檢測。某些惡性疾病一般用微生物學、生化和免疫 學技術無法查出病原體時,可用PCR來檢查。

  3、法醫(yī)和刑偵鑒定。

  4、癌基因的檢查。

  5、基因探針的制備。

  6、基因組測序、染色體巡視。

  7、cDNA庫的構建。

  8、基因突變的分析和定位誘變。

  9、DNA重組。

  10、基因的分享和克隆。

  標準的PCR過程分為三步

  DNA變性

  (90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA

  退火

  (60℃-65℃):系統(tǒng)溫度降低,引物與DNA模板結合,形成局部雙鏈。

  延伸

  (70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP為原料,從引物的3′端開始以從5′??′端的方向延伸,合成與模板互補的DNA鏈。
解析PCR實驗的原理、分類及品牌市場(圖1)

  PCR儀的分類

  根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。

  普通PCR儀

  一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。

  梯度PCR儀

  一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNA片段其最適合的退火溫度不同,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的最適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約經費。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。

  原位PCR儀

  是用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等。可保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,還能標出靶序列在細胞內的位置。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉變有著重大的實用價值。

  實時熒光定量PCR儀

  在普通PCR儀基礎上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,只是在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結果輸出。

  熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。

  PCR的各個品牌

  國產品牌

  上海領成、西安天隆、杭州郎基、珠海黑馬、杭州博日、上海宏石、廈門安普利、杭州晶格、北京亞力恩、北京東勝、上海楓嶺。

  目前國內市場主要被:上海領成,西安天隆,杭州郞基,珠海黑馬,杭州博日五大品牌所占有。

  普通PCR儀價格在18000-20000元左右,梯度PCR儀價格在26000-28000元左右,實時熒光定量PCR儀價格在130000-150000元左右。

  進口品牌

  美國ABI、美國Labnet萊伯特、美國Bio-rad伯樂、英國Genetech、英國Techne、德國Eppendorf艾本德、新加坡Esco藝思高、日本TaKaRa、日本ASTEC、澳大利亞Corbett柯柏特、德國Jena耶拿、德國biometra、德國BOECO、英國CLEAVER科麗沃、瑞士ROCHE羅氏、英國Quanta、德國PEQLAB、荷蘭Creacon、美國Cepheid、美國Thermo熱電。

  目前進口品牌中美國ABI,美國labnet,美國Bio-rad,日本TaKaRa,英國Techne,德國Eppendorf六大品牌占有率比較高。

  根據近年來銷量分析,其中美國ABI除了9700型普通PCR基因擴增儀和2720型基因擴增儀外,新推出的高精確性的Veriti梯度PCR儀,也是所有進口品牌梯度PCR儀中最受客戶認可的一款,是近兩年來銷量較高一款PCR儀;

  其次是美國Bio-rad;

  日本TaKaRa和美國Labnet梯度PCR儀,價格相對進口品牌中比較便宜,質量和性能也比較穩(wěn)定,從而深廣大客戶的認可,他們的銷售成交價在45000-50000左右,而其它同性能價格的儀器價格在,60000-80000元,所以近年來市場的占有率呈上升的趨勢;

  德國Eppendorf和美國Bio-rad是以直銷的模式銷售,因其壟斷直銷方式,外面的經銷商或者當地的經銷商無法進去競爭,所以相同性能的產品價格相對其他品牌要高很多,成交價格一般在7-9萬元左右,市場占有率相對有所下降;

  英國Techne在國內生產,價格相對進口品牌中要低很多,銷量有所上升,市場占有率也上升,價格在35000-40000元左右。